beta Arrestin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400642-ACT

ARRB1 は βアレスチン1（beta Arrestin 1）をコードする遺伝子であり、アゴニスト刺激後の G タンパク質共役受容体（GPCR）の脱感作、受容体の内在化、およびトラフィッキングを制御する多機能アダプターとして働きます。G タンパク質シグナルの終結にとどまらず、βアレスチン1は MAPK/ERK、PI3K–AKT、NF-κB 経路の出力を調節するシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）として機能し、状況依存的な転写応答や細胞骨格ダイナミクスを形作ります。これらの役割を通じて、ARRB1 は走化性、エンドサイトーシス、ならびに多様な受容体下流でのシグナル統合などの過程に影響を与えます。アレスチン介在性シグナルの破綻は、がん生物学、心代謝制御、神経精神疾患に関連する GPCR 回路などに関与する、増殖性および炎症性シグナル状態の変化と関連づけられています。

beta Arrestin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARRB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta Arrestin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARRB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARRB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta Arrestin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARRB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta Arrestin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARRB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta Arrestin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。