beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404570-NIC

ATP1B3は、Na⁺/K⁺-ATPase（細胞膜に存在するP型ATPase複合体）のβ3サブユニットをコードしており、膜電位、浸透圧バランス、二次能動輸送を支えるNa⁺およびK⁺の濃度勾配を維持するうえで必須です。イオン恒常性にとどまらず、Na⁺/K⁺-ATPaseのサブユニットはポンプの組み立てや細胞内輸送にも関与し、細胞接着、遊走、増殖制御に結びつくシグナル出力に影響を及ぼし得ます。ATP1B3の発現とポンプ機能は、イオン依存的なトランスポーターやキナーゼの制御を介して、上皮の極性、神経の興奮性、ストレス応答といった過程とも交差します。Na⁺/K⁺-ATPaseのサブユニット組成の破綻は、増殖シグナルの変調や組織機能障害と関連づけられており、ATP1B3は膜輸送とシグナル伝達のクロストークの機構研究に有用な標的です。

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP1B3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP1B3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP1B3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP1B3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。