BETA 3 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-425594-ACT-2

マウスのBhlhe22は、基本ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子BETA3をコードしており、中枢神経系の発生過程で遺伝子発現プログラムを形作ることで、神経細胞の分化と成熟を制御する調節因子である。BETA3は、bHLHによるDNA結合能と、前駆細胞からニューロンへの移行を協調的に制御する発生シグナル伝達経路との相互作用を通じて、細胞運命の決定、神経突起伸長、シナプス構築に関連する転写ネットワークを調節する。文献ではBhlhe22活性の変化が皮質回路の破綻や神経発達関連の表現型と関連づけられており、脳発達の基盤機構や神経疾患の生物学を理解する上で重要な研究対象となる。マウスモデルにおけるBhlhe22の遺伝子編集は、一次ニューロン、オルガノイド、あるいは生体内の発生環境において、系譜決定、回路形成、ならびに下流のトランスクリプトーム変化を機能的に検証するための手段となる。

BETA 3 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Bhlhe22の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BETA 3 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Bhlhe22 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBhlhe22転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BETA 3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBhlhe22遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBETA 3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBhlhe22発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBETA 3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。