BCoR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409976-ACT

BCOR（BCL6 corepressor）は、発生および系譜決定の過程で遺伝子抑制を協調的に制御する、核内の転写コレギュレーターであるBCoRをコードします。BCoRは、配列特異的転写因子やエピジェネティック修飾因子と協働し、細胞のアイデンティティと分化を形作るクロマチンリモデリングおよびヒストン修飾プログラムへとDNA結合因子をつなぐ、非カノニカルなポリコーム抑制複合体の一員として機能します。BCORの破綻または制御異常は、造血系および間葉系の文脈における転写制御の変化と関連しており、複数の腫瘍タイプや発達障害でも反復して関与が示されています。クロマチン関連コリプレッサーとしてのBCoRは、転写ネットワーク、細胞運命転換、ならびにエピジェネティックな安定性における役割の観点から、しばしば研究対象となっています。

BCoR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCORの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BCoR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCOR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCOR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BCoRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCOR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBCoR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCOR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBCoR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。