BCNP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404731-ACT

FAM129CはBCNP1をコードしており、免疫細胞の状態やストレス適応応答を形作るシグナル伝達および転写プログラムに関与するとされる細胞内タンパク質です。FAM129Cの発現は造血系細胞系譜で高く、炎症性シグナル伝達や、細胞の生存と分化に影響する受容体駆動性経路の調節に関連づけられています。BCNP1の発現変動は免疫関連疾患や複数のがんの文脈で報告されており、系譜可塑性や腫瘍―免疫相互作用を研究するための分子学的な足がかりとして有用であることが示唆されます。そのため、FAM129Cはヒトモデル系において、免疫、増殖、細胞ストレス生物学における経路の再配線を解析する上で有用な結節点となります。

BCNP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM129Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BCNP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM129C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM129C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BCNP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM129C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBCNP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM129C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBCNP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。