BCLAF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403820-ACT

BCLAF1（BCL2関連転写因子1）は核内のDNA/RNA結合タンパク質で、転写プログラムおよびmRNAプロセシングを調節し、クロマチン関連の制御を選択的スプライシングやRNA安定性と結び付けます。転写調節因子やスプライソソーム構成要素との相互作用を介して、細胞ストレス応答やDNA損傷関連プロセスに関与し、細胞周期の進行やアポトーシス関連シグナル伝達に影響を与えます。BCLAF1の発現または機能の破綻は、複数の腫瘍環境や免疫関連状態で報告されており、転写および転写後制御の変化が、増殖・生存・炎症に関わる遺伝子ネットワークを再編し得ます。これらの特性により、BCLAF1は、平常時およびストレス条件下における転写–スプライシング連関や経路間クロストークを解析するための有用な結節点となります。

BCLAF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCLAF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BCLAF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCLAF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCLAF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BCLAF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCLAF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBCLAF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCLAF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBCLAF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。