Bcl-w Double Nickaseプラスミド (h): sc-402639-NIC

BCL2L2は、抗アポトーシス性のBcl-2ファミリータンパク質であるBcl-wをコードしており、ミトコンドリア外膜に局在して内因性アポトーシスを制御します。Bcl-wは、細胞死を促進するBH3-onlyタンパク質に拮抗し、BAX/BAKによる孔形成を抑えることでシトクロムcの放出を制限します。ミトコンドリアの健全性を制御することにより、Bcl-wはカスパーゼ活性化の閾値に影響を与え、細胞ストレス応答、増殖因子欠乏、代謝の攪乱などの下流にある生存シグナルを統合します。BCL2L2の発現変動は、がん生物学における細胞生存プログラムの破綻と関連づけられており、また神経細胞の生存性や生殖細胞の維持といった、アポトーシス感受性が組織恒常性を左右する文脈でも研究されています。これらの機能により、BCL2L2はミトコンドリア・アポトーシス回路、ストレス適応、ならびにMAPKやPI3K–AKTシグナルとの経路間クロストークを解析するうえで有用な標的となります。

Bcl-w ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BCL2L2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BCL2L2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BCL2L2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BCL2L2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。