Partículas Lentivirales de Activación (m) BCAP: sc-429913-LAC

El gen murino **Pik3ap1** codifica el adaptador de células B para PI3K (BCAP), un andamiaje de señalización citosólico que acopla las señales del receptor de antígeno y de receptores de la inmunidad innata a la activación de la fosfoinosítido 3‑quinasa (PI3K). BCAP ayuda a integrar estímulos del receptor de células B, los TLR y los receptores de citocinas para modular la señalización PI3K–AKT, la actividad de MAPK aguas abajo y los programas transcripcionales que determinan la proliferación, la supervivencia y la diferenciación. En células inmunitarias, BCAP influye en el flujo de calcio, la reprogramación metabólica y la dinámica del citoesqueleto que sostienen la activación y la migración. La desregulación de la vía de PI3K y la alteración de la función de adaptadores son relevantes en estudios de inflamación, autoinmunidad y biología de neoplasias hematológicas, donde se ven perturbados los umbrales de señalización y las decisiones de destino de linaje.

Las partículas de activación lentiviral BCAP (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pik3ap1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BCAP (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pik3ap1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BCAP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pik3ap1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.