BBS9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404329-ACT

BBS9は、一次繊毛への膜タンパク質の輸送および一次繊毛からの回収を協調して制御するBBSome複合体の中核構成要素をコードしており、繊毛膜の組成維持とシグナル伝達の忠実性を支えています。BBS9は他のBBSタンパク質と協調することで、繊毛形成を形作り、Hedgehog経路をはじめとする繊毛依存的シグナルネットワークにおける受容体局在を制御する、鞭毛内輸送（IFT）関連プロセスに寄与します。BBS9機能の破綻は繊毛病の病態と関連しており、繊毛輸送の異常が発生パターニング、感覚シグナル、エネルギー恒常性に影響し得ます。これらの特性により、BBS9はヒト細胞モデルにおける繊毛依存機構、受容体輸送ダイナミクス、遺伝子型—表現型関係を検討するための有用な標的となります。

BBS9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BBS9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BBS9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BBS9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBBS9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BBS9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBBS9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBBS9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBBS9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBBS9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。