BAZ2B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436575-ACT

O gene Baz2b de camundongo codifica a BAZ2B, um regulador de cromatina contendo bromodomínio que interpreta marcas de acetil-lisina em histonas e ajuda a coordenar a remodelagem de nucleossomos e o controle transcricional. Por meio de seu papel na acessibilidade da cromatina e na regulação epigenética, a BAZ2B pode influenciar programas gênicos de desenvolvimento, a manutenção da identidade celular e redes transcricionais responsivas a estímulos. Alterações na sinalização mediada por bromodomínios e a remodelagem desregulada da cromatina estão amplamente associadas a mecanismos relevantes para o neurodesenvolvimento, a homeostase metabólica e estados transcricionais oncogênicos, tornando o Baz2b um ponto útil para investigar interações entre vias epigenéticas. A modulação experimental da expressão de Baz2b dá suporte a estudos de função de promotores/realçadores (enhancers), transcrição dependente de cromatina e reconfiguração de redes gênicas em sistemas de mamíferos.

BAZ2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Baz2b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAZ2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Baz2b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Baz2b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAZ2B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Baz2b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAZ2B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAZ2B em células tumorais com expressão de Baz2b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.