BATF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403270-ACT

BATF2 (basic leucine zipper ATF-like transcription factor 2) ist ein interferoninduzierbarer bZIP-Transkriptionsfaktor, der mit Mitgliedern der AP-1-Familie zusammenwirkt, um Genexpressionsprogramme zu modulieren, die mit angeborener Immunität und inflammatorischer Signalübertragung verknüpft sind. Er trägt zur Regulation von Zytokin- und Chemokin-Netzwerken bei und kann Differenzierungs- und Aktivierungszustände in Immun- und Epithelzellen beeinflussen. Die BATF2-Aktivität wird häufig in Signalwegen untersucht, die nachgeschaltet von Typ-I/II-Interferonen, Pattern-Recognition-Rezeptor-Signalen und einer breiteren stressantwortbezogenen transkriptionellen Kontrolle liegen. Eine dysregulierte BATF2-Expression wurde mit veränderten inflammatorischen Mikroumgebungen und immunbezogenen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, wie sie in Modellen infektiöser Erkrankungen und in der Krebsbiologieforschung beobachtet werden.

BATF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BATF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BATF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BATF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BATF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BATF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BATF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BATF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BATF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BATF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.