BAT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409707-ACT

PRRC2A codifica a proteína humana BAT2, um grande fator ligante de RNA rico em prolina, implicado na regulação gênica pós-transcricional, incluindo a estabilidade do mRNA e o controle da tradução. A BAT2 tem sido associada ao metabolismo de RNA responsivo ao estresse e à regulação mais ampla de programas de expressão gênica que influenciam o crescimento e a diferenciação celular. Variações genéticas e expressão desregulada no lócus PRRC2A/BAT2 foram relatadas em características relacionadas ao sistema imune e em regiões genômicas associadas ao câncer, sustentando sua relevância para vias que moldam a sinalização inflamatória e a biologia tumoral. Essas características tornam o PRRC2A um alvo útil para dissecar redes regulatórias de RNA e seus efeitos a jusante no fenótipo celular.

BAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRRC2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRRC2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRRC2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRRC2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAT2 em células tumorais com expressão de PRRC2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.