Barx1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419290-ACT

マウスBarx1は、胚発生期における上皮―間葉相互作用を制御するホメオボックス型転写因子をコードしており、頭蓋顔面のパターニング、鰓弓由来組織、ならびに消化管の器官形成において重要な役割を担います。BARX1は、BMPおよびWnt経路のクロストークなど、モルフォゲンシグナルに関連する転写プログラムを調節することで、系譜の指定や組織コンパートメント化に影響し、領域アイデンティティの形成に寄与します。胃では、Barx1は上皮分化を制約しつつ適切な腺構造の発達を支える間葉性シグナルの制御に関与すると考えられています。BARX1に関連する転写ネットワークの異常な制御は発生異常と関連づけられており、形態形成不全、器官パターニング、ならびに疾患に関連した細胞運命変化のモデルにおいて頻繁に解析されています。

Barx1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Barx1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Barx1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Barx1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBarx1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Barx1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBarx1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBarx1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBarx1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBarx1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。