BAP31 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402421-ACT

BCAP31はヒトBAP31タンパク質をコードしており、BAP31は新規合成された膜タンパク質の輸送および品質管理を制御する、多回膜貫通型の小胞体（ER）膜シャペロンである。BAP31はERからゴルジ体への輸送や小胞体関連分解（ERAD）に関与し、分泌経路のフラックスを、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル伝達およびプロテオスタシス維持と結び付けている。さらに、ER–ミトコンドリア接触部位においてアポトーシスやカルシウム恒常性にも関与し、細胞のストレス感受性に影響を与える。BCAP31/BAP31機能の破綻は、神経発生および腫瘍形成に関連する文脈で、タンパク質ハンドリングの変化や細胞生存プログラムの異常に関与すると示唆されている。

BAP31 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCAP31の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BAP31 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCAP31 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCAP31転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BAP31の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCAP31遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBAP31依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCAP31発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBAP31経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。