band 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401705-ACT

SLC4A1 codifica a banda 3 (trocador aniônico 1, AE1), uma proteína de membrana de eritrócitos altamente abundante que catalisa a troca eletroneutra de Cl⁻/HCO₃⁻ para sustentar o transporte de CO₂, o equilíbrio ácido–base sistêmico e a homeostase iônica dos glóbulos vermelhos. Por meio de interações com o citoesqueleto e com enzimas glicolíticas, a banda 3 contribui para a estabilidade da membrana, a manutenção da forma celular e a organização de complexos multiproteicos na membrana plasmática. Nas células intercaladas do rim, a AE1 participa do manejo do bicarbonato e da regulação do pH, ligando o SLC4A1 a vias centrais de transporte e homeostase. Perturbações genéticas e funcionais em SLC4A1 estão associadas a distúrbios da membrana dos eritrócitos e a defeitos em processos de acidificação, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos em biologia eritrocitária e transporte epitelial.

band 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC4A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

band 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC4A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC4A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de band 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC4A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de band 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via band 3 em células tumorais com expressão de SLC4A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.