Bag-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402929-ACT

BAG3 (Bag-3) é uma cochaperona induzível por estresse que se liga a HSP70/HSC70 para coordenar o controle de qualidade de proteínas, equilibrando a proteostase, a autofagia e a apoptose em células humanas. Ela dá suporte à autofagia seletiva assistida por chaperonas e influencia a organização do citoesqueleto, a adesão celular e a mecanotransdução, especialmente sob estresse proteotóxico ou oxidativo. Por meio dessas funções, a BAG3 contribui para a regulação de vias de sobrevivência celular e para a remoção de proteínas danificadas ou propensas à agregação. A expressão ou função desregulada de BAG3 tem sido associada a cardiomiopatia e a distúrbios neuromusculares, e é frequentemente estudada no contexto da adaptação de células tumorais ao estresse e da resistência ao estresse proteotóxico.

Bag-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BAG3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bag-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BAG3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BAG3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bag-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BAG3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bag-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bag-3 em células tumorais com expressão de BAG3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.