Bad Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400419-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- BadO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Bad (h) e o Plasmídeo Double Nickase Bad (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para BAD. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Bad Anticorpo (C-7): sc-8044
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Bad Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400419-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bad Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400419-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O BAD humano codifica a Bad, um membro pró-apoptótico apenas com domínio BH3 da família BCL-2, que integra sinais de sobrevivência e de morte na membrana externa mitocondrial. Bad promove a apoptose ao se ligar e neutralizar proteínas antiapoptóticas como BCL-2 e BCL-XL, facilitando assim a permeabilização da membrana externa mitocondrial dependente de BAX/BAK e a ativação de caspases. Sua atividade é rigidamente regulada por fosforilação a jusante das vias de sinalização PI3K–AKT e MAPK, o que pode sequestrar Bad por meio de proteínas 14-3-3 e direcionar as células para a sobrevivência. A desregulação da sinalização de BAD tem sido implicada em alterações nos limiares de apoptose relevantes para a biologia tumoral, a neurodegeneração e respostas ao estresse, tornando-o um ponto útil para estudar o controle do checkpoint mitocondrial.
Bad O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BAD em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BAD. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BAD. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BAD interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.