Plasmide CRISPR d'Activation (h) B-ATF: sc-401553-ACT

BATF (B-ATF) est un facteur de transcription à fermeture éclair leucine basique (bZIP) qui s’hétérodimérise avec des protéines de la famille JUN pour se lier à des éléments régulateurs de type AP-1 et façonner des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Dans les cellules immunitaires humaines, BATF est un régulateur clé de la différenciation des lymphocytes T et de leurs fonctions effectrices, notamment des voies contrôlant la production de cytokines, la biologie des lymphocytes T auxiliaires folliculaires (Tfh) et l’activation de l’immunité adaptative. En coopérant avec des membres de la famille IRF sur des motifs composites de l’ADN, BATF influence l’accessibilité de la chromatine et des réseaux transcriptionnels qui coordonnent la signalisation immunitaire et les réponses au stress cellulaire. Une activité dérégulée de BATF a été associée à des phénotypes immunitaires altérés et impliquée dans des mécanismes de maladies inflammatoires ainsi que dans des états transcriptionnels oncogéniques en contexte lymphoïde, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

B-ATF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BATF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

B-ATF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BATF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BATF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de B-ATF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BATF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de B-ATF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie B-ATF dans les cellules tumorales présentant une expression de BATF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.