Attractin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406420-ACT

ヒトATRNはアトラクチン（Attractin）をコードしており、免疫細胞間コミュニケーションや炎症制御に関与する膜貫通型糖タンパク質である。これには、T細胞—単球間相互作用や、ケモカイン駆動性の細胞接着の調節といった役割が含まれる。アトラクチンは、アグーチ関連経路との相互作用を介してメラノコルチンシグナル伝達の生物学とも関連づけられており、細胞表面ダイナミクスや細胞外リガンドとの相互作用を形作る過程に関与するとされる。免疫シナプスの挙動や白血球のトラフィッキングを規定するシグナルに影響を与えることから、ATRNは神経炎症および免疫調節異常の研究において重要であり、細胞—細胞間相互作用の変化が疾患表現型に寄与する状況でも検討されている。

Attractin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATRNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Attractin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATRN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATRN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Attractinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATRN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAttractin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATRN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAttractin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。