ATRX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400454-ACT

ATRX（αサラセミア／精神遅滞症候群X連鎖）は、SWI/SNF様のATP依存性クロマチンリモデリング因子をコードし、DAXXと協調して、反復性ヘテロクロマチン、テロメア、およびセントロメア周辺領域にヒストンバリアントH3.3を組み込みます。ヌクレオソーム配置、DNAメチル化パターン、高次クロマチン構造を調節することで、ATRXは転写制御、複製フォークの安定性、DNA損傷応答に影響を及ぼします。ATRXの欠失または機能不全は、エピジェネティックな制御異常とゲノム不安定性に関連し、神経発達障害や、がんに関連するテロメア維持経路の文脈でしばしば研究されています。

ATRX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATRXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATRX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATRX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATRX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATRXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATRX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATRX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATRX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATRX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。