ATP8A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406843

Panoramica

ATP8A1 codifica una flippasi di fosfolipidi P4-ATPasi che mantiene l’asimmetria lipidica della membrana plasmatica traslocando aminofosfolipidi come la fosfatidilserina e la fosfatidiletanolammina tra i due foglietti di membrana. Attraverso questa attività, ATP8A1 sostiene la curvatura di membrana, la gemmazione delle vescicole e il traffico endocitico, influenzando l’organizzazione del citoscheletro e le dinamiche di membrana polarizzate. L’alterazione dell’asimmetria lipidica può modificare le piattaforme di segnalazione e i processi dipendenti dalla membrana, collegando la funzione di ATP8A1 a vie che regolano il trasporto intracellulare e la sopravvivenza cellulare. La disregolazione di ATP8A1 è stata studiata nel contesto di fenotipi neurologici e metabolici, in cui composizione di membrana e traffico vescicolare sono determinanti critici dell’omeostasi cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP8A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATP8A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATP8A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATP8A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP8A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATP8A1 per lo studio della segnalazione di ATP8A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATP8A1 critici per la funzione di ATP8A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATP8A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ATP8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATP8A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP8A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ATP8A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATP8A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATP8A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.