ATP7A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402387-ACT

ATP7Aは、銅を輸送するP型ATPアーゼをコードしており、細胞質から銅を排出するとともに、分泌経路へ送り込んで銅酵素（クプロ酵素）の金属化（メタレーション）を行うことで、細胞内の銅分布を調節します。銅の排出と細胞内輸送を制御することにより、ATP7Aはレドックス恒常性、ミトコンドリア機能および酸化ストレス応答、さらにゴルジ網における酵素成熟を支えています。ATP7Aの活性が破綻すると銅バランスが乱れ、クプロ酵素機能の低下を介して、結合組織形成や神経発生シグナル伝達などのプロセスに影響を及ぼします。そのためATP7Aは、銅代謝異常症のモデルや、銅依存性酵素活性に関連する細胞ストレス経路の研究で広く用いられています。

ATP7A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP7Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATP7A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP7A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP7A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATP7Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP7A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATP7A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP7A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATP7A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。