ATP6E Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404046-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ATP6EO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ATP6E (h) e o Plasmídeo Double Nickase ATP6E (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATP6V1E1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ATP6E Anticorpo (G-3): sc-514143
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ATP6E Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP6E Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1E1 codifica a subunidade E1 (ATP6E) do domínio periférico V1 da H\+-ATPase vacuolar (V-ATPase), uma ATPase rotatória multissubunitária que impulsiona a translocação de prótons para acidificar endossomos, lisossomos e outros compartimentos intracelulares. Ao controlar o pH das organelas, a atividade da V-ATPase regula a endocitose mediada por receptores, a degradação lisossomal, a autofagia, o processamento de antígenos e o tráfego vesicular, com efeitos a jusante sobre a detecção de nutrientes e vias de sinalização acopladas ao transporte de membrana. A perturbação da composição ou da função das subunidades da V-ATPase pode desestabilizar a homeostase celular e tem sido associada a distúrbios hereditários de acidificação e a fenótipos de neurodesenvolvimento, bem como a alterações na proteostase e nas respostas ao estresse metabólico. Assim, ATP6V1E1 é um locus útil para estudar a regulação dependente de pH da dinâmica de membranas e da função de organelas em células humanas.
ATP6E O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP6V1E1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP6V1E1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP6V1E1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP6V1E1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.