ATG7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400997-ACT

ヒトATG7は、オートファゴソームの生合成に必要なユビキチン様結合反応を触媒することでマクロオートファジーに必須となる、E1様の活性化酵素をコードしている。ATG7はATG12およびLC3/ATG8ファミリータンパク質を活性化し、ATG12–ATG5複合体の形成とLC3の脂質化を促進することで、カーゴの隔離、オルガネラの品質管理、ならびにストレス適応を制御する。プロテオスタシス、ミトコンドリア恒常性、栄養感知応答における中心的役割を通じて、ATG7は炎症、神経変性、感染生物学、腫瘍代謝に関連する経路にも影響を及ぼす。ATG7依存的オートファジーの制御異常は細胞生存やストレス耐性の変化と関連づけられており、ATG7はオートファジーおよびリソソーム分解研究で広く研究されている重要なノードである。

ATG7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATG7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATG7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATG7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATG7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATG7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATG7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATG7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATG7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATG7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。