Atg16 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404024-NIC

ATG16L1 は Atg16 をコードしており、これはマクロオートファジーにおけるオートファゴソーム形成および LC3/ATG8 の脂質化に必須な ATG12–ATG5–ATG16L1 複合体の中核構成因子である。ATG16L1 は、ファゴフォアの伸長とカーゴの隔離を協調させることで、細胞恒常性、タンパク質およびオルガネラの品質管理、ならびに代謝性・炎症性ストレスへの応答の制御に寄与する。ATG16L1 依存的オートファジーは、抗菌性ゼノファジーやインフラマソーム活性の制御を含む自然免疫シグナル伝達とも連関しており、この経路を粘膜バリア機能および免疫制御と結び付けている。遺伝的多様性や ATG16L1 機能の変化は、炎症性腸疾患の感受性や宿主—微生物相互作用の破綻と関連づけられており、関連する上皮細胞および免疫細胞モデルにおける機序解明研究の動機となっている。

Atg16 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATG16L1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATG16L1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATG16L1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATG16L1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。