Atg16 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404024-ACT

ヒトATG16L1はAtg16をコードしており、Atg16はATG12–ATG5–ATG16L1複合体の中核構成要素として、新生ファゴフォアにおけるLC3の脂質化を誘導することでオートファゴソーム形成を規定する。マクロオートファジーにおける役割を通じて、Atg16は細胞質の品質管理、オルガネラのターンオーバー、代謝ストレスへの細胞適応を支えると同時に、自然免疫シグナル伝達や抗微生物応答とも交差する。ATG16L1活性の変化は炎症の制御異常や上皮バリア恒常性の破綻と関連づけられており、ATG16L1の遺伝的多型は炎症性腸疾患に対する感受性と関連する。したがってATG16L1発現を調節することは、関連するヒト細胞モデルにおいて、オートファジーフラックス、免疫代謝のクロストーク、ならびにストレス応答表現型を解析するうえで有用である。

Atg16 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATG16L1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Atg16 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATG16L1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATG16L1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Atg16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATG16L1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAtg16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATG16L1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAtg16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。