ATF-6α Double Nickaseプラスミド (h): sc-400259-NIC

活性化転写因子6α（ATF6α）は、小胞体（ER）膜に係留された転写因子であり、アンフォールドタンパク質応答（UPR）の中核的なセンサー兼エフェクターとして機能する。ERストレス下では、ATF6αはゴルジ体へ輸送され、制御された膜内プロテオリシスによってN末端断片が切り出される。この断片は核へ移行してシャペロンおよび小胞体関連分解（ERAD）遺伝子の発現を誘導し、プロテオスタシスと分泌経路の恒常性を協調的に維持する。ATF6αシグナルはPERKおよびIRE1経路とも交差し、ストレス適応の過程で翻訳制御、酸化還元バランス、炎症性アウトプットの形成に関与する。ATF6軸の活性の破綻は、代謝機能障害、神経変性、ならびに低酸素や栄養制限へのがんの適応など、慢性的なプロテオトキシックストレスを特徴とする病態との関連が示唆されている。

ATF-6α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATF6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATF6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATF6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATF6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。