ATF-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430721

Panoramica

Il fattore di trascrizione attivante 5 (ATF-5), codificato nel topo dal gene Atf5, è un fattore di trascrizione della famiglia basic leucine zipper (bZIP) che regola programmi di espressione genica responsabili dell’adattamento allo stress cellulare, della differenziazione e della sopravvivenza. ATF-5 partecipa alla segnalazione della risposta integrata allo stress e può collegare segnali a monte associati a eIF2α/ATF4 a output trascrizionali che influenzano la funzione mitocondriale e la proteostasi. Nel sistema nervoso e in altri tessuti in sviluppo, ATF-5 è stato associato alle decisioni di linea cellulare e al mantenimento di stati proliferativi o simili a progenitori attraverso un controllo trascrizionale dipendente dal contesto. Un’attività deregolata di ATF-5 è stata collegata a una tolleranza allo stress aberrante e a vie di sopravvivenza cellulare alterate, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici sul rimodellamento, correlato a patologie, delle reti trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atf5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atf5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atf5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATF-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atf5 per lo studio della segnalazione di ATF-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atf5 critici per la funzione di ATF-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atf5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATF-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atf5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATF-5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATF-5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atf5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atf5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.