ATF-1/ATF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400488-ACT

ATF1 codifica o fator de transcrição ativador 1 (ATF-1), um fator de transcrição bZIP da família CREB/ATF que se liga a elementos de resposta ao cAMP para modular a expressão gênica dependente de estímulos. O ATF-1 integra sinais a jusante das vias cAMP/PKA e MAPK e é regulado por fosforilação para coordenar programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação, adaptação ao estresse e sobrevivência. Por meio de hetero- e homodimerização com fatores relacionados, como CREB e membros da família JUN, o ATF-1 contribui para a dinâmica de redes transcricionais que moldam transições de estado celular. A atividade desregulada de ATF1 e rearranjos cromossômicos envolvendo ATF1 têm sido associados a assinaturas transcricionais oncogênicas em contextos tumorais específicos, sustentando sua utilidade em estudos mecanísticos de sinalização aberrante e controle transcricional.

ATF-1/ATF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATF-1/ATF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATF-1/ATF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATF-1/ATF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATF-1/ATF1 em células tumorais com expressão de ATF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.