ATE1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405539

Panoramica

ATE1 codifica l’arginiltransferasi 1, un enzima chiave della via della regola dell’N-end che, in modo post-traduzionale, aggiunge arginina alle estremità N-terminali delle proteine, creando degron che indirizzano i substrati alla degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la regolazione della stabilità proteica, ATE1 influenza la proteostasi, l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione in risposta allo stress, ed è stata collegata al controllo della migrazione e dell’adesione cellulare tramite la modulazione di proteine associate all’actina. L’arginilazione dipendente da ATE1 contribuisce anche all’adattamento mitocondriale e allo stress ossidativo, plasmando l’abbondanza di specifici regolatori. La disregolazione dei componenti della regola dell’N-end, incluso ATE1, è associata ad alterazioni dell’omeostasi cellulare rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e fenotipi di sviluppo in sistemi sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATE1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATE1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATE1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATE1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATE1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATE1 per lo studio della segnalazione di ATE1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATE1 critici per la funzione di ATE1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATE1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ATE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATE1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATE1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ATE1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATE1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATE1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.