ASS1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401923-NIC

ヒトASS1（アルギニノコハク酸合成酵素1）は、ATP依存的にシトルリンとアスパラギン酸を縮合させてアルギニノコハク酸を生成する反応を触媒します。これはアンモニアの解毒を可能にし、全身の窒素恒常性を支える尿素回路の中核段階です。肝臓での尿素生成にとどまらず、ASS1活性は細胞内アルギニンの利用可能性にも影響し、尿素回路のフラックスを一酸化窒素（NO）の生合成やより広範なアミノ酸代謝と結び付けます。ASS1の発現や機能の変化は、Ⅰ型シトルリン血症などの尿素回路異常症と関連し、また腫瘍においてアルギニン要求性（アルギニン栄養要求性）や代謝リプログラミングが検討される文脈でも観察されています。これらの特性により、ASS1は窒素代謝の取り扱い、ミトコンドリア‐細胞質間の代謝カップリング、ならびにアミノ酸制限に対するストレス応答を研究するうえで有用な結節点となります。

ASS1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ASS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ASS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ASS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ASS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。