ASH1L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402901-ACT

ASH1L（absent, small, or homeotic discs 1-like）は核内のヒストンリシンメチルトランスフェラーゼをコードし、転写伸長を促進し、細胞種特異的な遺伝子発現プログラムを維持するためにH3K36メチル化を付加します。ASH1Lはクロマチンリーダードメインと触媒ドメインを介して、発生関連遺伝子座におけるPolycomb（ポリコーム）による抑制と活性化のバランス調整に関与し、神経分化や系譜決定などの過程に影響を与えます。ASH1Lによるエピジェネティック制御は、クロマチンリモデリング、エンハンサー活性、転写の忠実性を司る経路とも交差します。ASH1Lの遺伝的変異や発現制御の破綻は、神経発達に関わる表現型や遺伝子制御ネットワークの変化と関連づけられており、クロマチン駆動型の転写機構を解明する研究において重要な標的となっています。

ASH1L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASH1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASH1L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASH1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASH1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASH1Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASH1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASH1L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASH1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASH1L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。