ASF1A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404071-ACT

ASF1Aは、DNA複製・転写・DNA損傷修復の過程でヌクレオソームの組み立てと解体を協調的に制御する、進化的に保存されたヒストンH3–H4シャペロンであるanti-silencing function 1Aをコードします。ASF1AはCAF-1やHIRAなどのクロマチン制御因子と協働することで、複製に共役したクロマチン再構築、ヒストン供給の動態、ならびに細胞周期を通じたエピジェネティック状態の維持を支えます。ASF1A活性の変化は、ゲノム安定性の維持機構やクロマチンアクセシビリティを乱し、がんやクロマチンリモデリング異常を伴う他の疾患で見られる増殖制御の破綻やストレス応答異常と関連づけられています。クロマチン恒常性の中心的ノードとして、ASF1Aは複製ストレス、チェックポイントシグナル伝達、転写リプログラミングを司る経路の研究で頻繁に取り上げられます。

ASF1A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASF1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASF1A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASF1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASF1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASF1Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASF1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASF1A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASF1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASF1A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。