ASC/TMS1/PYCARD Double Nickaseプラスミド (h): sc-400151-NIC

PYCARD（ASC/TMS1としても知られる）は、PYDドメインとCARDドメインを介してNLRP3やAIM2などのセンサータンパク質をCASP1に連結し、インフラマソームの集合を核形成するアダプタータンパク質をコードします。この足場としての機能により、近接性誘導によるカスパーゼ1の活性化が可能となり、その結果、pro-IL-1βおよびpro-IL-18の切断と、ガスダーミンDを介したパイロトーシス細胞死の誘導が起こります。これによりASCは、自然免疫およびストレス応答シグナル伝達の中心に位置づけられます。ヒト細胞においてPYCARDは、病原体認識、無菌性炎症、ならびにマクロファージおよび上皮の免疫応答を形作る細胞死経路に関与します。PYCARD/ASCシグナルの制御異常は、慢性炎症性疾患、神経炎症、代謝性疾患、腫瘍関連炎症に関与するとされ、サイトカイン成熟やインフラマソーム動態の機構研究における一般的な標的となっています。

ASC/TMS1/PYCARD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PYCARD 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PYCARD内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PYCARDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PYCARDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。