Artemis Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405295-ACT-2

O gene humano DCLRE1C codifica a Artemis, uma nuclease de DNA essencial para reparar quebras de dupla fita durante a recombinação V(D)J e a junção de extremidades não homólogas (NHEJ), na qual coopera com o complexo DNA-PK para abrir extremidades codificantes em grampo (hairpin) e processar terminais danificados. A atividade da Artemis sustenta a estabilidade do genoma e o desenvolvimento adequado de linfócitos ao permitir a montagem precisa dos genes dos receptores de antígeno e ao resolver lesões complexas de DNA geradas por radiação ionizante ou estresse replicativo. Variantes com perda de função em DCLRE1C estão associadas à imunodeficiência combinada grave e à radiossensibilidade, destacando seu papel na interseção entre a imunidade adaptativa e a sinalização da resposta a danos no DNA. Estudos de edição gênica e genômica funcional direcionados a DCLRE1C/Artemis são usados para modelar defeitos da via de NHEJ, investigar os requisitos de processamento de extremidades no reparo de quebras de dupla fita e avaliar impactos em rearranjos cromossômicos e na formação do repertório imune em células humanas.

Artemis O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCLRE1C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Artemis O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCLRE1C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCLRE1C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Artemis. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCLRE1C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Artemis no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Artemis em células tumorais com expressão de DCLRE1C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.