ARP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405241

Panoramica

NR2F2 codifica il recettore nucleare orfano umano ARP-1 (noto anche come COUP-TFII), un fattore di trascrizione indipendente dal ligando che si lega al DNA come monodimero o eterodimero per regolare programmi genici dello sviluppo e del metabolismo. ARP-1 integra input di segnalazione che plasmano le decisioni sul destino cellulare, i processi angiogenici e linfangiogenici e l’organogenesi, attraverso il controllo trascrizionale di reti legate al crosstalk tra recettori nucleari e all’attività degli enhancer. Nei tessuti adulti, NR2F2 influenza la biologia della muscolatura liscia vascolare e dell’endotelio, l’adipogenesi e l’omeostasi mitocondriale/metabolica, con effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e differenziazione. Un’espressione o un’attività deregolate di NR2F2 sono state associate alla biologia dei tumori, a difetti cardiovascolari congeniti e a disturbi metabolici, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della regolazione trascrizionale e della specificazione di lignaggio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NR2F2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NR2F2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NR2F2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NR2F2 per lo studio della segnalazione di ARP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NR2F2 critici per la funzione di ARP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NR2F2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NR2F2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ARP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NR2F2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NR2F2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.