ARMCX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407214-ACT

ARMCX1 (armadillo repeat-containing, X-linked 1) codifica uma proteína de repetições armadillo associada às mitocôndrias, implicada na regulação do tráfego mitocondrial, da dinâmica e do controle de qualidade das mitocôndrias de maneira dependente do tipo celular. Por meio de interações com o citoesqueleto e com a maquinaria de posicionamento de organelas, o ARMCX1 tem sido ligado a processos como o crescimento de neuritos, respostas ao estresse celular e a manutenção da homeostase mitocondrial. Alterações na atividade da família ARMCX têm sido associadas à desregulação da apoptose, à remodelação metabólica e a mudanças na motilidade celular, tornando o ARMCX1 relevante para estudos de neurobiologia e de fenótipos relacionados ao câncer. Por ser um gene ligado ao X, o ARMCX1 também oferece um contexto útil para investigar regulação com viés sexual e efeitos de dose em modelos de células humanas.

ARMCX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARMCX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARMCX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARMCX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARMCX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARMCX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARMCX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARMCX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARMCX1 em células tumorais com expressão de ARMCX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.