ARK-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402041-LAC

AURKB codifica la chinasi Aurora B (ARK-2), una chinasi serina/treonina che funge da nucleo catalitico del complesso passeggero cromosomico, coordinando la condensazione dei cromosomi, gli attacchi cinetocoro–microtubulo, la segnalazione del checkpoint del fuso e la citocinesi. Fosforilando substrati come l’istone H3 e proteine chiave del centromero/cinetocoro, AURKB regola la correzione degli errori durante la mitosi e assicura una corretta segregazione cromosomica. Un’attività di AURKB deregolata è associata a instabilità cromosomica, aneuploidia e alterazioni del controllo proliferativo osservate in diversi contesti tumorali, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per studiare il controllo mitotico e il mantenimento del genoma. La modulazione sperimentale di AURKB supporta lo studio delle transizioni del ciclo cellulare, della dinamica del checkpoint di assemblaggio del fuso e dei meccanismi di tolleranza allo stress replicativo.

Le particelle di attivazione lentivirale ARK-2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AURKB in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ARK-2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AURKB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ARK-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AURKB e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.