ARID3A CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-404552-ACT-2

ヒトARID3Aは、ATリッチ相互作用ドメインを有するDNA結合性転写因子をコードし、特にB細胞の発生および免疫グロブリン遺伝子の制御における系譜決定に関与するクロマチンアクセシビリティと遺伝子発現プログラムを調節する。ARID3Aは、プロモーター／エンハンサー要素や共調節複合体との相互作用を介して、細胞周期進行、分化、エピジェネティックなリモデリングを司る転写制御ネットワークに参画する。ARID3Aの発現または活性の破綻は、異常な造血分化や免疫シグナル伝達と関連し、腫瘍性の転写プログラムや自己免疫に関連する遺伝子シグネチャーの文脈でしばしば研究されている。ヒト細胞におけるARID3Aの遺伝子編集により、RNA-seq、ATAC-seq、ChIP-seq、ならびに機能的分化モデルなどのアッセイを用いて、転写因子結合の依存関係、エンハンサー機能、下流経路の再配線を機序的に解明することが可能となる。

ARID3A CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARID3Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARID3A CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における ARID3A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARID3A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARID3Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARID3A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARID3A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARID3A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARID3A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。