ARID1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402365-ACT

ARID1Bは、ATリッチ相互作用ドメイン含有タンパク質1Bをコードしており、発生および分化の過程でヌクレオソーム配置と転写プログラムを制御するSWI/SNF（BAF）ATP依存性クロマチンリモデリング複合体の必須サブユニットです。エンハンサーのアクセシビリティとプロモーターのリモデリングを協調的に調節することで、ARID1Bは複数のシグナル伝達文脈にわたり、系譜（ライン）指定、細胞周期制御、DNA損傷応答性遺伝子の発現に影響を与えます。ARID1B機能の変化は、神経発達障害や多様ながんで示唆されており、クロマチン制御の破綻が異常な転写状態や細胞アイデンティティの障害に寄与すると考えられています。これらの特性により、ARID1Bはエピジェネティック制御、転写制御、ならびに遺伝子型から表現型への対応付け（genotype-to-phenotype mapping）において広く研究されている重要因子です。

ARID1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARID1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARID1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARID1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARID1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARID1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARID1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARID1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARID1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARID1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。