ARID1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400469-ACT

ARID1A codifica uma subunidade central do complexo de remodelamento de cromatina dependente de ATP SWI/SNF (BAF), que regula o posicionamento dos nucleossomos para controlar programas de transcrição, especificação de linhagem e checkpoints do ciclo celular. Por meio do controle da acessibilidade da cromatina, ARID1A influencia respostas a danos no DNA e vias de estabilidade genômica, incluindo a coordenação com a sinalização associada a p53 e ao estresse de replicação. A desregulação ou perda da atividade de ARID1A é frequentemente ligada à reprogramação epigenética e ao uso alterado de enhancers, o que pode impactar a diferenciação e a capacidade proliferativa. ARID1A é recorrentemente alterado em múltiplos tipos de tumor e é amplamente estudado por seu papel em transições do estado da cromatina, ocupação por fatores de transcrição e vulnerabilidades dependentes do contexto.

ARID1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARID1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARID1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARID1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARID1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARID1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARID1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARID1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARID1A em células tumorais com expressão de ARID1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.