CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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ARH3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-430308-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARH3 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARH3ダブルニカースプラスミド（m）およびARH3ダブルニカースプラスミド（m2）は、Adprhl2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ARH3 抗体 (A-7): sc-374162
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARH3 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-430308-NIC | 20 µg | $410.00 |
Adprhl2 は ARH3 をコードしており、ARH3 は、DNA 損傷シグナル伝達の過程で生じるセリン結合型 ADP リボシル化および関連するポリ（ADP リボース）代謝産物を脱修飾するモノ ADP リボシル加水分解酵素です。修飾タンパク質から ADP リボースを除去することで、ARH3 は PARP 依存性応答の強度を調整し、NAD⁺/ADP リボースの恒常性を維持するとともに、複製ストレスや酸化ストレス下でのゲノム安定性を支えます。マウス細胞では、ARH3 の機能はクロマチン制御やストレス応答経路と交差し、細胞生存や炎症関連シグナル伝達に影響します。ADP リボシル化のターンオーバーの破綻は、神経変性様の表現型や遺伝毒性ストレスに対する感受性亢進と関連しており、そのため Adprhl2 は DNA 修復と細胞レジリエンスの機構研究における有用な結節点となります。
ARH3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Adprhl2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Adprhl2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Adprhl2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Adprhl2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。