ARH2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-410510-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARH2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARH2ダブルニカースプラスミド（h）およびARH2ダブルニカースプラスミド（h2）は、ADPRHL1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARH2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-410510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARH2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-410510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADPRHL1はARH2をコードしており、ARH2はADPリボシル加水分解酵素（ADP-ribosylhydrolase）ファミリーの一員で、タンパク質の翻訳後修飾であるモノADPリボシル化を解除する働きに関与すると考えられています。モノADPリボシル化は、タンパク質の分解・代謝回転、シグナル伝達、細胞のストレス応答に影響を与えます。ARH2はADPリボース代謝の制御を介して、DNA損傷応答やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）に関連する経路に作用し得る位置づけにあり、これらの過程は疾患状態でしばしば再配線されます。ヒト組織では、ADPRHL1の発現は筋肉および心臓の生物学と関連づけられており、ADPリボシル化ダイナミクスがミトコンドリア機能や収縮性細胞の恒常性にどのように寄与するかを検討する根拠となります。ADPリボース依存的シグナル伝達の破綻は炎症性・変性性の表現型と広く関係するため、ARH2は細胞生存やストレス適応の機構研究における有用な結節点となります。
ARH2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADPRHL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADPRHL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADPRHL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADPRHL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。