ARH2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-433335-ACT

マウスの Adprhl1 は、モノADPリボシル化の動態調節や、それに関連するタンパク質ターンオーバーのシグナルに関与するとされる ADP-リボシルヒドロラーゼ様ファミリーの一員である ARH2 をコードします。同ファミリーには酵素活性が非典型的なものも存在しますが、ARH2 は細胞ストレス応答、代謝制御、シグナル伝達への寄与という観点から研究されており、DNA損傷応答やレドックス恒常性と交差するプロセスにも関わると考えられています。心臓・筋生物学のモデルでは、Adprhl1 の発現が筋原線維の組織化や発生プログラムと関連づけられており、心筋症に関連する経路や組織リモデリング機構の解明において重要な標的となります。これらの特性により、ARH2 は ADPリボース関連シグナルが臓器特異的な生理機能とどのように接続しているかを解析するための有用な結節点となります。

ARH2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Adprhl1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARH2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Adprhl1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAdprhl1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARH2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAdprhl1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARH2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAdprhl1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARH2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。