ARG1/Arginase 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418076-ACT

ヒトARG1は、L-アルギニンをL-オルニチンと尿素に変換する反応を触媒する細胞質型の金属酵素であるアルギナーゼ1をコードしており、尿素回路の最終段階を担うとともに、窒素排泄の主要な制御因子として機能します。細胞内のアルギニン利用可能量を制御することで、ARG1はオルニチンのフラックスを介してポリアミンおよびプロリン生合成に影響し、さらに一酸化窒素合成酵素（NOS）との基質競合を通じて間接的に一酸化窒素（NO）産生を調節し得ます。ARG1活性は肝細胞の代謝恒常性と密接に関連し、また骨髄系細胞における免疫代謝プログラムにも関与します。そこではアルギニン枯渇がT細胞応答性や炎症シグナル伝達のあり方を左右し得ます。ARG1の発現や機能の破綻はアンモニア解毒障害と関連し、腫瘍関連骨髄系細胞の生物学をはじめ、アルギニン代謝が再構築されるその他の状況においても関与が示唆されています。

ARG1/Arginase 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARG1/Arginase 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARG1/Arginase 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARG1/Arginase 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARG1/Arginase 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。