ARG-Vasopressin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403139-ACT

AVPはアルギニン・バソプレシンをコードしており、これは神経下垂体由来のペプチドホルモンで、プレプロホルモンとして合成されたのちにプロセシングを受け、全身の水分バランス、血管緊張、ならびに神経内分泌の恒常性を調節します。腎集合管の主細胞におけるAVPR2シグナル伝達を介して、バソプレシンはcAMP/PKA依存的にアクアポリン2を管腔側膜へ移行（トラフィッキング）させ、抗利尿応答を協調的に制御します。一方、AVPR1Aを介する経路は血管収縮や、より広範なストレス応答性のシグナル伝達にも寄与します。AVPに関連する制御異常は、浸透圧調節や血圧制御の障害（中枢性尿崩症や不適切抗利尿など）に関与し、さらに中枢神経系での発現パターンから、神経精神医学および行動の文脈でも研究されています。厳密に制御される視床下部の遺伝子として、AVPは刺激依存的な転写、ペプチドのプロセシング、分泌経路の生物学を理解するためのモデルにもなります。

AVP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AVPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AVP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AVP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAVP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AVPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAVP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAVP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAVP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAVP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。