Arg Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-417779-LAC

ABL2 codifica Arg (ABL2), uma tirosina quinase não receptora que integra sinais de recetores de fatores de crescimento e da adesão mediada por integrinas para regular a remodelação do citoesqueleto de actina, a formação de rugosidades de membrana e a migração celular. Arg atua em vias que acoplam a sinalização por fosforilação à dinâmica do citoesqueleto, incluindo a renovação das adesões focais e processos ligados a GTPases da família Rho, e pode modular a endocitose e as respostas celulares a estímulos mecânicos. A atividade desregulada de quinases da família ABL tem sido associada a alterações do comportamento invasivo, sinalização aberrante de sobrevivência e reconfiguração de redes oncogénicas em múltiplos contextos tumorais. Por isso, ABL2/Arg é amplamente estudada em modelos de motilidade celular, sinalização dependente de adesão e crosstalk entre vias impulsionado por quinases, relevante para a biologia do cancro e para processos do neurodesenvolvimento.

As Partículas de Ativação Lentivirais Arg (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ABL2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Arg (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ABL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Arg. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ABL2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.