Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ARF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400799
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARF6 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ARF6, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARF6 Antibody (3A-1): sc-7971
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400799 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il fattore di ADP-ribosilazione 6 (ARF6) è una piccola GTPasi che regola la dinamica della membrana plasmatica controllando endocitosi, riciclo e rimodellamento del citoscheletro di actina. Alternando ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP, ARF6 coordina il traffffico di integrine, caderine e recettori tirosin-chinasici, influenzando polarità cellulare, migrazione e citocinesi. La segnalazione dipendente da ARF6 interseca le vie PI3K/AKT, MAPK e delle GTPasi della famiglia Rho, contribuendo a modellare la formazione di protrusioni di membrana e il trasporto vescicolare. Un’attività di ARF6 deregolata è stata associata a fenotipi invasivi e a un traffico recettoriale alterato in modelli di cancro, nonché a funzioni anomale di neuroni e cellule immunitarie in contesti rilevanti per diverse patologie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARF6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARF6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARF6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARF6.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARF6 per lo studio della segnalazione di ARF6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni ARF6 critici per la funzione di ARF6
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARF6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ARF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ARF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARF6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ARF6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ARF6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARF6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARF6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.