Arc CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419184

概要

Arc（activity-regulated cytoskeleton-associated protein：活動依存性細胞骨格関連タンパク質）は、神経活動によって誘導される即時早期遺伝子であり、マウスにおける学習・記憶の基盤となるシナプス可塑性に必須です。ArcはAMPA型グルタミン酸受容体のエンドサイトーシス輸送を制御し、アクチン細胞骨格の再構築を協調させることで、長期増強（LTP）および長期抑圧（LTD）の際のシナプス強度を調整します。また、活動依存的な遺伝子発現プログラムや、神経回路の興奮性を安定化させる恒常性シナプススケーリングにも関与します。Arcシグナルの調節異常は、神経発達および神経精神疾患に関連する表現型と結び付けられており、認知機能障害や発作に伴うネットワーク変化の文脈で頻繁に研究されています。

Arc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるArc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Arc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Arcのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Arcタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Arcシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Arc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Arcの機能に不可欠なArcエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Arcゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Arc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびArc CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Arc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Arc HDRプラスミド（m）および Arc HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはArcホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のArc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。