Aquaporin 8/AQP8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402490-NIC

AQP8はアクアポリン8をコードする遺伝子であり、膜貫通型のチャネルとして細胞膜を介した水輸送を促進します。また細胞の状況に応じて、過酸化水素などの小さな中性溶質も透過させることがあります。AQP8は浸透圧恒常性、上皮における体液ハンドリング、細胞内のレドックスシグナル伝達に寄与し、膜透過性をミトコンドリア機能、代謝制御、炎症シグナル伝達などのプロセスと結び付けています。AQP8の発現量や局在の変化は、上皮バリア機能障害や酸化ストレス応答の破綻と関連しており、これらは複数の病態生理学的状況で観察される特徴です。ヒト組織では、AQP8は肝胆道系の生理、消化管上皮の輸送、免疫細胞における酸化バーストの調節との関連で研究されることが多いです。

Aquaporin 8/AQP8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AQP8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AQP8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AQP8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AQP8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。